U-CyTech biosciences es una compañía registrada en Holanda que se dedica a la investigación básica y aplicada en el campo de la inmunología en especial con citoquinas. U-CyTech fabrica y vende una amplia gama de sistemas innovadora para detectar citoquinas tales como ELISA, ELISPOT y sistemas de Fluorospot diseñados para su uso en humanos, monos y roedores. Los reactivos para estos sistemas están disponibles en dos formatos diferentes: kits completos y pareja de anticuerpos.
Los kits de ELISA y ELISPOT requieren reactivos de alta calidad. Consecuentemente, U-CyTech ha decidido desarrollar en sus propios laboratorios, una amplia gama de anticuerpos monoclonales y policlonales altamente específcos que van dirigidos a un extenso rango de citoquinas de diferentes especies. La compatibilidad validada de estos anticuerpos con ciertos reactivos auxiliares de alta calidad, garantiza un funcionamiento con resultados óptimos y libres de problemas de operación. Además, el ensayo de FluoroSpot ha sido diseñado para identificar aquellas células individuales que liberan dos citoquinas diferentes. Las células que segregan dos citoquina distintas pueden ser visualizadas a través del uso de dos detectores de anticuerpos fluorescentes, en lugar del uso de anticuerpos detectores marcados con enzimas.
ELISA test
U-CyTech ha desarrollado diferentes tipos de kits de ELISA para la detección de citoquinas en el sobrenadante de cultivos celular, de plasma o suero. El tipo de ELISA llamado “sándwich", que es producido por U-CyTech, es una prueba simple y sensible para la determinación de los niveles de citoquinas en los fluidos biológicos. El ensayo se realiza en placas de microtitulación de 96 pocillos recubiertas con anticuerpos, donde las diluciones en serie con concentraciones desconocidas de citoquinas, son añadidas en los pocillos. Luego, la citoquina que se quiere determinar y que se a asociado al primer anticuerpo se asocia con un segundo anticuerpo detector que es específico para la citoquina en cuestión y que esta marcado con biotina. Seguidamente se añade un polimero de estreptavidina que esta marcado como una enzima. Posteriormente, se introduce un substrato cromogénico lo cual genera un producto multi-color que se puede determinar espectrofotométricamente.
U-CyTech ofrece una amplia gama de kits de ELISA para la detección de citoquinas en humanos y monos; quimiocinas o granzimas en sobrenadante de cultivos celulares, plasma o suero. Por ejemplo, GM-CSF, granzima B, el IFN-γ, los miembros de la familia de interleuquina (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, etc.), perforina y TNF-α.
Los kits de ELISA para monos, han sido validados para varias especies monos del viejo mundo, incluyendo los macacos rhesus, monos cynomolgous, babuinos, macacos de Berbaría, macacos cola-de-león, macacos cola-de-cerdo, macacos de Sulawesi de cresta y macacos japoneses. U-CyTech también ha desarrollado kits de ELISA para la detección de citoquinas del Titi (especie mono del nuevo mundo), incluyendo el IFN-γ, TNF-α, IL-13 y IL-17A.
Por otra parte, U-CyTech ofrece varios kits de ELISA para la detección de citoquinas de la rata (IFN-γ, IL-4, TNF-α) y del ratón (IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF-α) en sobrenadante de cultivo celular plasma o suero.
T cell ELISPOT test
El ensayo de citoquina ELISPOT está diseñado para enumerar las células secretoras de citoquinas en las suspensiones de células individuales de tejido linfoide, tejido del sistema nervioso, médula ósea o de preparaciones de células mononucleares de sangre periférica. El ensayo tiene la ventaja de detectar solamente células-T de memoria/activadas. La liberación de citoquinas puede ser detectada a nivel de células individuales, permitiendo una determinación directa de las frecuencias de células-T. La alta sensibilidad y elevado rendimiento de este ensayo, permite una enumeración directa de las células-T específicas para ciertos péptidos sin necesidad de expansión previa in vitro. Todo esto hace que el ensayo de ELISPOT sea eminentemente adecuado para estudiar las respuestas de las células-T.
Las células se incuban en pocillos de una placa de 96 pocillos ELISPOT recubiertas con un anticuerpo de alta afinidad, que captura la citoquina secretada, la quimioquinas, o la granzima. Posteriormente, las células se lisan y los residuos se eliminan mediante un lavado. Subsecuentemente, anticuerpos específicos para las citoquinas que están marcados con biotina son añadidos para que se unan al producto capturado. La adición de la estreptavidina marcada como enzima y un substrato, producen una zona coloreada (punto). Puntos de color revelan el sitio de la secreción de citoquinas, lo que representa individualmente a cada célula-T secretora. Estas pueden contarse y ser identificadas utilizando un lector automático de ELISPOT.
Los kits de ELISPOT que ofrece U-CyTech son kits para la detección de citoquinas o quimiocinas humanas o de monos, o células productoras de granzimas, incluyendo los kits para GM-CSF, Granzima B, IFN-γ, los miembros de la familia de interleuquina (IL-1β, IL -2, IL-4, IL-17A, IL-21, etc.) y TNF-α.
Los anticuerpos de los kits de mono han sido validados para la detección de células productoras de citoquinas en varias especies de monos del Viejo Mundo, incluyendo los macacos rhesus, los macacos de Berbería, los macacos cola de león, los macacos cola de cerdo, los macacos de Sulawesi, los macacos japoneses, monos cynomolgous y los babuinos. U-CyTech también ha desarrollado kits de ELISPOT para la detección de citoquinas del Titi (especie mono del nuevo mundo), incluyendo el IFN-γ, IL-12/23p40, TNF-α, IL-13 y IL-17A.
Además, U-CyTech ofrece varios kits de ELISPOT de la rata (IFN-γ, IL-4) y del ratón (IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF-α).
B cell ELISPOT test
El ensayo de ELISPOT de células B ha sido diseñado para identificar y enumerar las células B secretoras de anticuerpos individuales en suspensiones de células individuales de células mononucleares de sangre periférica de los seres humanos y los monos. La técnica se basa en el mismo principio de fase sólida inmuno-enzimática del ELISPOT de células-T. El primer paso en el ensayo es la expansión de las células B de memoria por estimulación policlonal o antigénica. Las células B ya expandidas son posteriormente enumeradas en la placa de 96 pocillos ELISPOT que están recubiertos con anti-inmunoglobulinas o el antígeno de interés. Luego, las células que forman puntos son detectados por anticuerpos marcados dirigidos a la clase de inmunoglobulina de interés.
Cada kit contiene un reactivo para la estimulación de las células de memoria B, anticuerpos de recubrimiento para la determinación del número total de células secretoras de anticuerpo, anticuerpos marcados para la detección de la clase de immunogloblina de interes y los agentes de coloración.
Además, U-CyTech ofrece varios kits de (IgG, IgG1, IgG2a, IgG2b) ELISPOT de células B del ratón y otras kits de ELISPOT de células B están en siendo desarrollados.
FluoroSpot test
El ensayo FluoroSpot de dos colores es una modificación del ensayo de ELISPOT y ha sido desarrollado para la detección de dos citoquinas liberadas por una sola célula-T. El ensayo se basa en el uso de anticuerpos marcados con diferentes fluorocromos que permiten la detección de células-T productoras de dos citoquinas pre-seleccionadas. El ensayo Fluorospot es particularmente útil para el análisis de las subpoblaciones de células T con diferentes perfiles de citoquinas. Los kits se suministran con una placa de fondo de membrana PVDF, las cuales están especialmente optimizadas para el ensayo FluoroSpot.
U-CyTech ofrece una amplia variedad de kits de citoquinas FluoroSpot humanas y de monos, incluyendo kits para la detección combinada de IFN-γ otra citoquina (por ejemplo, IL-2, IL-10). Los kits de Fluorospot para la detección de citoquinas múltiples están siendo desarrollados.